eIF1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403809

Descripción general

EIF1B codifica el factor de iniciación de la traducción eucariota 1B (eIF1B), un pequeño factor de iniciación implicado en etapas tempranas de la iniciación de la traducción dependiente de cap y en la selección del codón de inicio mediante la regulación de la dinámica del complejo de preiniciación ribosomal 40S. Al influir en el escaneo y en la fidelidad de la iniciación, eIF1B contribuye a la homeostasis del proteoma y a la respuesta celular a señales de crecimiento y al estrés que modulan la síntesis global de proteínas. La alteración de las redes de factores de iniciación de la traducción se asocia con frecuencia a programas de proliferación celular modificados y a vías de adaptación al estrés, procesos comúnmente estudiados en biología del cáncer y en investigación del neurodesarrollo. Por ello, EIF1B es relevante para estudios mecanísticos que conectan el control translacional con la reprogramación de la expresión génica en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF1B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EIF1B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EIF1B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EIF1B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EIF1B para la investigación de la señalización de eIF1B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EIF1B críticos para la función de eIF1B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EIF1B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eIF1B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido eIF1B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EIF1B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF1B (h) y el plásmido HDR eIF1B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EIF1B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EIF1B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.