Plásmido Doble Nickase (h) EHD1: sc-407060-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EHD1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EHD1 (h) y el plásmido de doble nickasa EHD1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EHD1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EHD1 | sc-407060-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EHD1 | sc-407060-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EHD1 (dominio EH que contiene 1) codifica una ATPasa de la familia de proteínas EHD que regula el reciclaje endocítico y la remodelación de membranas, coordinando el retorno de receptores y lípidos desde los endosomas de reciclaje hacia la membrana plasmática. Mediante interacciones con fosfolípidos y adaptadores endocíticos, EHD1 favorece el tráfico asociado a clatrina, la formación de endosomas tubulares y programas de reciclaje de receptores que influyen en la amplitud de la señalización y la migración celular. El tráfico dependiente de EHD1 afecta a vías vinculadas a la captación de nutrientes y al recambio de receptores de factores de crecimiento, incluidas la dinámica de reciclaje del receptor de transferrina y de EGFR. En la literatura, la expresión o función desregulada de EHD1 se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo y con una reconfiguración de la señalización en modelos de cáncer, así como con alteraciones de la polaridad epitelial y del tráfico de membranas neuronales relevantes para la neurobiología.
EHD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EHD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EHD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EHD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EHD1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.