Plásmido Doble Nickase (h) Egr-3: sc-401740-NIC

EGR3 codifica el factor de transcripción de tipo “dedo de zinc” Egr-3, un producto génico de respuesta inmediata inducido por diversas señales extracelulares y por la señalización dependiente de la actividad. Egr-3 regula programas transcripcionales sensibles a estímulos que influyen en la diferenciación celular, la proliferación y las respuestas adaptativas, integrando vías aguas abajo de MAPK/ERK y de la señalización dependiente de calcio para remodelar la expresión génica. En los sistemas nervioso e inmunitario, Egr-3 contribuye a la plasticidad impulsada por la actividad y a los programas funcionales de los linfocitos, vinculando el control transcripcional con los estados de activación celular. La desregulación de la expresión de EGR3 se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, así como con una regulación inmunitaria alterada, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de redes génicas acopladas a estímulos.

Egr-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EGR3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EGR3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EGR3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EGR3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.