Plásmido CRISPR de Activación (m) EGFL8: sc-429875-ACT

Egfl8 codifica EGFL8, una proteína secretada asociada a la matriz extracelular que contiene dominios tipo EGF y que favorece la comunicación célula–célula y célula–matriz. En tejidos de ratón, la expresión de EGFL8 se ha vinculado con la regulación del patrón del desarrollo, el comportamiento epitelial y endotelial, y procesos de remodelación extracelular que influyen en la adhesión, la migración y la organización tisular. A través de estas funciones, EGFL8 es relevante en contextos de señalización que coordinan la morfogénesis y las interacciones estroma–parénquima, incluidas vías que se conectan con programas sensibles a factores de crecimiento. Por ello, la actividad o expresión alterada de EGFL8 se estudia en modelos de remodelación tisular desregulada y de biología de enfermedades proliferativas, donde los cambios en el microambiente pueden moldear el destino celular y los fenotipos asociados a la invasión.

EGFL8 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Egfl8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EGFL8 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Egfl8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Egfl8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EGFL8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Egfl8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EGFL8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EGFL8 en células tumorales con expresión de Egfl8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.