Particules Lentivirales d'Activation (h) EGFL6: sc-411850-LAC

EGFL6 code une protéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, appartenant à la famille des protéines à domaines de type EGF, qui contribue aux interactions cellule–matrice et à la signalisation du microenvironnement. EGFL6 a été impliqué dans la régulation du comportement des cellules endothéliales et épithéliales, notamment la migration, l’adhésion et la survie, ce qui concorde avec des rôles dans le remodelage tissulaire et les processus associés à l’angiogenèse. Grâce à ses domaines de type EGF, EGFL6 peut moduler des réseaux de signalisation qui recoupent les voies médiées par les intégrines et des programmes sensibles aux facteurs de croissance influençant la dynamique du cytosquelette. Une expression dérégulée d’EGFL6 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme levier moléculaire pour étudier le remodelage vasculaire, la biologie du microenvironnement tumoral et les phénotypes de motilité cellulaire dans des systèmes modèles humains.

Les particules d'activation lentivirales EGFL6 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EGFL6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EGFL6 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EGFL6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EGFL6. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EGFL6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.