Plásmido CRISPR de Activación (h) EGFL6: sc-411850-ACT

EGFL6 (proteína 6 similar al factor de crecimiento epidérmico) es una proteína secretada asociada a la matriz extracelular, enriquecida en compartimentos vasculares y estromales, donde favorece las interacciones célula–matriz y la comunicación dentro del microambiente tisular. A través de sus repeticiones tipo EGF, EGFL6 influye en comportamientos de células endoteliales y mesenquimales relacionados con la adhesión, la migración y la remodelación angiogénica, procesos que se entrecruzan con la señalización de integrinas y vías sensibles a factores de crecimiento. Se ha informado de una expresión alterada de EGFL6 en múltiples contextos tumorales y en otros trastornos caracterizados por neovascularización aberrante y reprogramación de la matriz extracelular, lo que la convierte en un marcador útil y un nodo funcional para estudiar fenotipos impulsados por el microambiente. La investigación sobre EGFL6 humana suele centrarse en cómo las señales extracelulares remodelan programas transcripcionales que controlan la invasión, el patrón vascular y la organización tisular.

EGFL6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EGFL6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EGFL6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EGFL6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EGFL6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EGFL6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EGFL6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EGFL6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EGFL6 en células tumorales con expresión de EGFL6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.