EF-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420117

Descripción general

Eef2 codifica el factor de elongación eucariota 2 (EF-2), una GTPasa conservada que impulsa la translocación ribosomal durante la elongación de la traducción del ARNm y, de este modo, controla las tasas globales de síntesis proteica. La actividad de EF-2 está estrechamente regulada por fosforilación mediante la quinasa eEF2, aguas abajo de vías sensoras de nutrientes y de estrés, incluida la señalización de mTOR, lo que vincula la producción traduccional con el estado energético, la hipoxia y la actividad sináptica. A través de su papel central en la proteostasis, EF-2 influye en el crecimiento celular, las respuestas al estrés y los programas de diferenciación que dependen de una rápida remodelación del proteoma. La desregulación del control traduccional que involucra a EF-2 y eEF2K se ha implicado en disfunción neurológica y en la adaptación metabólica asociada a tumores, lo que convierte a Eef2 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación de la traducción en sistemas murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EF-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eef2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eef2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eef2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EF-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eef2 para la investigación de la señalización de EF-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Eef2 críticos para la función de EF-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eef2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EF-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EF-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eef2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EF-2 (m) y el plásmido HDR EF-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eef2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eef2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.