Plásmido CRISPR de Activación (h) EF-2: sc-401163-ACT

El gen humano **EEF2** codifica el factor de elongación 2 (EF-2), un componente central del ciclo de elongación de la traducción que cataliza la translocación del ribosoma a lo largo del ARNm de manera dependiente de GTP. La actividad de EF-2 es un determinante clave de la producción del proteoma y está regulada por vías de señalización de nutrientes y estrés, incluidas mTOR y el eje eEF2K, que coordinan la síntesis proteica con el estado energético celular. Las alteraciones en la expresión de **EEF2** o en la dinámica de fosforilación de EF-2 pueden modificar programas de control traduccional que influyen en la proliferación, la adaptación al estrés y la remodelación metabólica. Como nodo central de la homeostasis traduccional, **EEF2** se estudia con frecuencia en contextos de señalización oncogénica, neurobiología y respuestas al estrés celular, donde una síntesis proteica desregulada contribuye a fenotipos asociados a enfermedad.

EF-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EEF2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EF-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EEF2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EEF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EF-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EEF2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EF-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EF-2 en células tumorales con expresión de EEF2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.