EF-1 γ Double Nickase Plasmid (h): sc-405691-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EF-1 γ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EF-1 γ Double-Nickase-Plasmid (h) und EF-1 γ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EEF1G abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EF-1 γ: sc-393378
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EF-1 γ Double Nickase Plasmid (h) | sc-405691-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EF-1 γ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405691-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF1G kodiert den eukaryotischen Translations-Elongationsfaktor 1 Gamma (EF-1γ), eine Kernkomponente des eEF1-Komplexes, der während der mRNA-Translation aminoacylierte tRNAs zum Ribosom liefert. Über die Proteinsynthese hinaus trägt EF-1γ zur Organisation des Zytoskeletts und zur Proteostase bei und verknüpft so die Kontrolle der Translation mit Programmen für Zellwachstum und Stressanpassung. Eine veränderte Expression oder Netzwerk-Konnektivität von EEF1G wurde in proliferativen und stressassoziierten Zellzuständen beobachtet, was es für die Untersuchung translationsassoziierter Umbauprozesse in der Krankheitsbiologie relevant macht. Als stark vernetzter Knoten in RNA‑Protein- und Translationsfaktor-Interaktomen wird EF-1γ häufig als Ansatzpunkt genutzt, um die Kopplung zwischen Proteinsynthese, Signalübertragung und Zellzustandsübergängen zu untersuchen.
EF-1 γ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EEF1G-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EEF1G abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EEF1G-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EEF1G-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.