Plásmido Doble Nickase (h) EF-1 δ: sc-405987-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EF-1 δ consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EF-1 δ (h) y el plásmido de doble nickasa EF-1 δ (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EEF1D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EF-1 δ Anticuerpo (A-5): sc-393731
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EF-1 δ | sc-405987-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EF-1 δ | sc-405987-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF1D codifica el factor de elongación 1-delta (EF-1δ), un componente del complejo eEF1 que apoya la elongación de la traducción del ARNm al promover la entrega de ARNt aminoacilados al sitio A del ribosoma y coordinar el intercambio de nucleótidos en eEF1A. Más allá de la síntesis proteica básica, EF-1δ contribuye al control traduccional vinculado al crecimiento celular, la proteostasis y la señalización sensible al estrés, conectando la actividad ribosomal con redes reguladoras más amplias. La alteración de la expresión o la función de EEF1D se ha asociado con cambios en la homeostasis de la traducción y en programas de adaptación celular que con frecuencia se remodelan en contextos proliferativos y neurodegenerativos. Como resultado, EEF1D es un nodo útil para estudiar cómo la maquinaria de traducción se interrelaciona con vías que gobiernan la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés.
EF-1 δ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EEF1D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EEF1D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EEF1D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EEF1D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.