Plasmide Double Nickase (h) EDG-5: sc-401114-NIC

S1PR2 (EDG-5) code un récepteur couplé aux protéines G de la sphingosine-1-phosphate (S1P) qui s’associe преимуратement à Gαi, Gαq et Gα12/13 pour réguler la signalisation Rho/ROCK, la mobilisation de Ca2+ via la phospholipase C, ainsi que les sorties des voies PI3K/AKT et MAPK. Par ces voies, EDG-5 module la fonction de barrière endothéliale, le trafic des cellules immunitaires, le remodelage du cytosquelette et, selon le contexte, le contrôle de la prolifération et de la migration. La signalisation de S1PR2 s’entrecroise avec des programmes inflammatoires et fibrosants et a été impliquée dans la dysfonction vasculaire, la régulation métabolique et la biologie du microenvironnement tumoral. Une activité du récepteur dérégulée est donc pertinente pour les études de l’inflammation, de l’angiogenèse et de la motilité cellulaire dans des modèles de maladies humaines.

EDG-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus S1PR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de S1PR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de S1PR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de S1PR2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.