Plásmido CRISPR de Activación (h) EDG-5: sc-401114-ACT

S1PR2 (EDG-5) codifica un receptor acoplado a proteína G de esfingosina-1-fosfato (S1P) que transduce señales lipídicas extracelulares en cambios coordinados de la motilidad celular, la función de barrera y la supervivencia. EDG-5 se acopla a Gαi, Gαq y Gα12/13 para modular las vías de señalización Rho/ROCK, MAPK/ERK, PI3K/AKT y PLC/Ca2+, moldeando la dinámica del citoesqueleto y las respuestas transcripcionales. A través de estas rutas, S1PR2 influye en el tráfico de células endoteliales e inmunitarias, el tono vascular y la señalización inflamatoria. La actividad desregulada de S1PR2 y los gradientes de S1P se han implicado en procesos relevantes para la invasión de células cancerosas, la fibrosis y la patología mediada por el sistema inmunitario, lo que convierte a EDG-5 en una diana útil para estudios mecanísticos de vías de señalización.

EDG-5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S1PR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EDG-5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S1PR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S1PR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EDG-5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S1PR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EDG-5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EDG-5 en células tumorales con expresión de S1PR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.