Plásmido Doble Nickase (h) EDG-1/S1P1/S1PR1: sc-400413-NIC

S1PR1 (EDG-1/S1P1) codifica un receptor acoplado a proteína G para la esfingosina-1-fosfato que regula la integridad de la barrera endotelial, la maduración vascular y el tráfico de células inmunitarias. La activación del receptor desencadena señalización dependiente de Gi con rutas aguas abajo de PI3K–AKT, MAPK/ERK y GTPasas de la familia Rho, que moldean la dinámica del citoesqueleto, la organización de las uniones adherentes y las respuestas quimiotácticas. En contextos hematopoyéticos y vasculares, S1PR1 contribuye a la salida de linfocitos, la brotación angiogénica y el tono inflamatorio mediante su integración con redes de citocinas y quimiocinas. La desregulación de la señalización de S1PR1 se ha asociado con alteraciones de la permeabilidad vascular y de la homeostasis inmunitaria en estudios de inflamación, biología cardiovascular y microambiente tumoral, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación de señalización por receptores.

EDG-1/S1P1/S1PR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus S1PR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de S1PR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de S1PR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con S1PR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.