EDG-1/S1P1/S1PR1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400413

Descripción general

S1PR1 (EDG-1/S1P1) codifica un receptor acoplado a proteína G para la esfingosina-1-fosfato (S1P) que traduce la señalización lipídica extracelular en programas intracelulares que controlan la migración celular, la supervivencia y la función de barrera. Mediante su acoplamiento a Gi y a efectores posteriores como PI3K–AKT, MAPK/ERK y las GTPasas de la familia Rho, S1PR1 regula la dinámica del citoesqueleto, la adhesión y la permeabilidad endotelial. Es un nodo central en la biología de la vía de S1P que influye en el desarrollo vascular y el tráfico de células inmunitarias, y cuya desregulación se ha implicado en la disfunción vascular asociada a la inflamación y en la remodelación del microambiente tumoral. Como receptor de membrana con salidas de señalización dependientes del contexto, S1PR1 se estudia ampliamente en modelos de angiogénesis, salida de leucocitos y homeostasis endotelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EDG-1/S1P1/S1PR1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen S1PR1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del S1PR1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de S1PR1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EDG-1/S1P1/S1PR1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en S1PR1 para la investigación de la señalización de EDG-1/S1P1/S1PR1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de S1PR1 críticos para la función de EDG-1/S1P1/S1PR1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de S1PR1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus S1PR1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EDG-1/S1P1/S1PR1 (h) y el plásmido HDR EDG-1/S1P1/S1PR1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología S1PR1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana S1PR1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.