Plásmido CRISPR de Activación (h) EDG-1/S1P1/S1PR1: sc-400413-ACT

S1PR1 (EDG-1/S1P1) es un receptor acoplado a proteína G sensible a la esfingosina-1-fosfato (S1P) que integra la señalización lipídica extracelular para regular la integridad de la barrera endotelial, la maduración vascular y el tráfico de células inmunitarias. Tras la unión del ligando, S1PR1 se acopla principalmente a Gi para coordinar las vías de señalización PI3K–AKT, MAPK/ERK y de la familia Rac/Rho, que modelan la dinámica del citoesqueleto, la estabilidad de las uniones adherentes y las respuestas quimiotácticas. Este receptor es clave en la angiogénesis y la salida de linfocitos, al vincular los gradientes de S1P con el movimiento y el posicionamiento coordinados de las células a través de los compartimentos vasculares y linfoides. La desregulación de la señalización de S1PR1 se ha implicado en redes de señalización inflamatoria, disfunción vascular y la biología del microambiente tumoral, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de inmunidad, permeabilidad y procesos asociados a la metástasis.

EDG-1/S1P1/S1PR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S1PR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EDG-1/S1P1/S1PR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S1PR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S1PR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EDG-1/S1P1/S1PR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S1PR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EDG-1/S1P1/S1PR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EDG-1/S1P1/S1PR1 en células tumorales con expresión de S1PR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.