Edc3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402917-ACT

O gene humano EDC3 codifica a proteína Edc3, um intensificador evolutivamente conservado do “decapping” de mRNA que conecta o complexo de decapping DCP1–DCP2 a repressores adicionais para promover a degradação de transcritos. A Edc3 atua em corpos de processamento citoplasmáticos (P-bodies) e participa da regulação gênica pós-transcricional ao acoplar a repressão traducional à degradação de mRNA no sentido 5′→3′, moldando assim a abundância de RNA em estado estacionário e programas de expressão responsivos ao estresse. Por meio do controle da estabilidade de RNA, o EDC3 influencia vias que regulam a proteostase, a sinalização de estresse inata e transições de estado celular que dependem de uma rápida remodelação do transcriptoma. A desregulação da degradação de mRNA e da dinâmica dos P-bodies é amplamente implicada na biologia do câncer e em neurodegeneração, tornando o EDC3 um ponto útil para estudos mecanísticos do metabolismo de RNA em contextos relevantes para doenças.

Edc3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EDC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Edc3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EDC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EDC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Edc3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EDC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Edc3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Edc3 em células tumorais com expressão de EDC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.