Ect2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401538-NIC

ECT2 codifica per l’epithelial cell transforming 2 (Ect2), un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) per le Rho che attiva RhoA, Rac1 e Cdc42 per coordinare il rimodellamento del citoscheletro, la polarità cellulare e la citocinesi. Ect2 è regolata tramite fosforilazione e sequestro spaziale; la rilocalizzazione durante la mitosi consente l’assemblaggio dell’anello contrattile guidato da RhoA e l’ingressione del solco di clivaggio. Attraverso la segnalazione delle Rho GTPasi e il cross-talk con le reti di controllo del ciclo cellulare, Ect2 influenza la dinamica dell’adesione, la migrazione e la stabilità del genoma. Una disregolazione dell’espressione o dell’attività di ECT2 è stata associata a proliferazione aberrante e a fenotipi invasivi in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per studiare la segnalazione oncogenica e la fedeltà mitotica.

Ect2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ECT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ECT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ECT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ECT2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.