Plasmide Double Nickase (h) ECM1: sc-404321-NIC

ECM1 (extracellular matrix protein 1) est une glycoprotéine sécrétée, enrichie dans la matrice extracellulaire associée à la membrane basale, et impliquée dans l’organisation de l’architecture tissulaire via des interactions avec des composants structuraux et de signalisation de la MEC. Elle contribue à la régulation de l’adhérence cellule–matrice, au remodelage de la matrice extracellulaire et aux signaux du microenvironnement qui influencent l’homéostasie épithéliale et les processus angiogéniques. Une expression altérée d’ECM1 a été associée à une dérégulation de la signalisation stromale et à des modifications pathologiques de la peau, des muqueuses et d’autres tissus, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation extracellulaire. En tant que facteur associé à la matrice, ECM1 est souvent étudiée dans le contexte d’un remodelage de type fibrotique, de changements tissulaires liés à l’inflammation et de la biologie du microenvironnement tumoral.

ECM1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ECM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ECM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ECM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ECM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.