Plasmide CRISPR d'Activation (m) ECM1: sc-420098-ACT

Le gène murin **Ecm1** code la protéine 1 de la matrice extracellulaire (ECM1), une glycoprotéine matricellulaire sécrétée qui module l’organisation de la matrice extracellulaire et la signalisation cellule–matrice. ECM1 participe à des processus tels que la différenciation épidermique, le remodelage angiogénique et la régulation de la structure de la membrane basale, via des interactions avec des composants matriciels et des réseaux de protéases. Une expression altérée d’ECM1 a été associée à une désorganisation de l’architecture tissulaire, à un remodelage de type fibrotique et à des modifications du comportement du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour des études sur l’inflammation, la réparation des plaies et le dialogue stroma–épithélium. Dans les modèles murins, **Ecm1** est fréquemment étudié pour ses rôles dans la biologie cutanée, l’homéostasie vasculaire et les voies de signalisation dépendantes de la matrice extracellulaire.

ECM1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ecm1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ECM1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ecm1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ecm1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ECM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ecm1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ECM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ECM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ecm1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.