Plásmido Doble Nickase (h) ECE-1: sc-402379-NIC

ECE1 codifica la enzima convertidora de endotelina 1 (ECE-1), una metaloproteasa de zinc unida a la membrana que escinde las big endotelinas para generar péptidos de endotelina bioactivos, modulando así la señalización de los receptores de endotelina. Mediante la regulación de la vasoconstricción mediada por endotelina, la función endotelial y el tono del músculo liso, ECE-1 contribuye a vías que controlan la homeostasis vascular y las respuestas inflamatorias. ECE-1 también se relaciona con el procesamiento extracelular de péptidos en los sistemas secretor y endosomal, influyendo en la disponibilidad local de péptidos y en la dinámica de activación de los receptores. La alteración de la actividad o la expresión de ECE1 se ha asociado con fenotipos de remodelado cardiovascular y vascular pulmonar, desregulación renal y metabólica, y señalización del microambiente asociada a tumores en múltiples sistemas modelo.

ECE-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ECE1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ECE1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ECE1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ECE1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.