EBP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402177

Panoramica

PA2G4 codifica EBP1, un fattore legante RNA e proteine che si localizza sia nel citoplasma sia nel nucleo e partecipa al coordinamento dell’espressione genica a livello trascrizionale e traduzionale. EBP1 è stato collegato alla segnalazione a valle delle tirosin-chinasi recettoriali e alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, della proliferazione e della differenziazione attraverso la modulazione della stabilità dell’mRNA, di processi associati ai ribosomi e di programmi trascrizionali. Influenzando vie di controllo della crescita e reti di espressione genica responsiva allo stress, PA2G4 è spesso studiato nel contesto della segnalazione oncogenica e di altre patologie caratterizzate da proliferazione disregolata. Le sue funzioni molteplici lo rendono un nodo utile per analizzare come i segnali dei fattori di crescita vengano integrati con il metabolismo dell’RNA e con la regolazione associata alla cromatina nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EBP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PA2G4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PA2G4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PA2G4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EBP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PA2G4 per lo studio della segnalazione di EBP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PA2G4 critici per la funzione di EBP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PA2G4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PA2G4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EBP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EBP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PA2G4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PA2G4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.