Plasmide CRISPR d'Activation (h) EBF3: sc-402181-ACT

EBF3 (early B-cell factor 3) est un facteur de transcription de type hélice–boucle–hélice qui se lie à l’ADN afin de réguler des programmes d’expression génique contrôlant la différenciation et la maturation neuronales, ainsi que l’organisation plus générale du développement. Dans les cellules humaines, EBF3 contribue à des réseaux transcriptionnels déterminant les lignages et coopère avec la chromatine et des complexes de cofacteurs pour façonner les transitions d’état cellulaire et la régulation génique spécifique des tissus. Une expression ou une fonction dérégulée d’EBF3 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des circuits transcriptionnels altérés observés dans divers contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud utile pour explorer les réseaux de régulation génique du développement. L’étude des voies dépendantes d’EBF3 peut éclairer la manière dont la temporalité transcriptionnelle et la sélection des promoteurs/activateurs (enhancers) influencent les décisions de destin cellulaire et la transcription en réponse au stress.

EBF3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EBF3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EBF3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EBF3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EBF3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EBF3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EBF3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EBF3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EBF3 dans les cellules tumorales présentant une expression de EBF3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.