Plásmido CRISPR de Activación (h) EBF1: sc-401258-ACT

EBF1 (factor temprano de células B 1) es un factor de transcripción definidor de linaje que regula la accesibilidad de la cromatina y los programas de expresión génica necesarios para el compromiso con el linaje B, la diferenciación y la homeostasis del sistema inmunitario. En las células hematopoyéticas, EBF1 coopera con factores como PAX5 y E2A para coordinar redes transcripcionales que controlan la recombinación V(D)J, la competencia para la señalización del receptor de células B y la supervivencia. Más allá de la linfopoyesis, EBF1 desempeña funciones en la adipogénesis y el neurodesarrollo mediante un control transcripcional específico del contexto. La desregulación de la expresión o la función de EBF1 se ha asociado con un desarrollo deficiente de las células B y con estados transcripcionales alterados observados en la biología de enfermedades hematológicas.

EBF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EBF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EBF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EBF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EBF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EBF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EBF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EBF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EBF1 en células tumorales con expresión de EBF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.