Plasmide CRISPR/Cas9 KO EAP30 (h): sc-406312

Présentation

SNF8 code pour EAP30, un composant central du complexe ESCRT-II, qui coordonne le tri endosomal des protéines membranaires ubiquitinylées vers les corps multivésiculaires en vue de leur dégradation lysosomale. Par le remodelage membranaire dépendant des ESCRT, EAP30 favorise la diminution des récepteurs, le trafic endolysosomal et le couplage d’ESCRT-II à ESCRT-III lors de la formation de vésicules intraluminales. Ces processus influencent l’atténuation des voies de signalisation, l’homéostasie des protéines membranaires, ainsi que certains aspects de la cytocinèse et du bourgeonnement viral qui reposent sur la machinerie ESCRT. Un dérèglement du trafic médié par les ESCRT a été associé à une altération de la signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance, à un stress de protéostase et à une instabilité génomique, ce qui rend SNF8/EAP30 pertinent pour les études en biologie du cancer et des défauts endolysosomaux liés à la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EAP30 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SNF8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SNF8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SNF8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EAP30.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SNF8 pour l'étude de la signalisation de EAP30, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SNF8 essentiels à la fonction de EAP30
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SNF8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EAP30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EAP30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SNF8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EAP30 plasmide HDR (h) et le EAP30 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SNF8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SNF8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.