EAF1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-428881-LAC

Das murine Gen **Eaf1** kodiert **EAF1**, einen nukleären transkriptionellen Kofaktor, der ursprünglich durch seine Assoziation mit Elongationsfaktoren der **ELL-Familie** und dem **Super Elongation Complex** charakterisiert wurde und dadurch mit der Freisetzung der RNA‑Polymerase‑II‑Pausierung und produktiver Transkription verknüpft ist. EAF1 ist an der Regulation von Genexpressionsprogrammen beteiligt, die den Zellzyklus, die Differenzierung und stressresponsive Transkription beeinflussen, und kann mit chromatinassoziierter regulatorischer Maschinerie interagieren. Eine Dysregulation von Elongations- und Transkriptionskontrollwegen unter Beteiligung von EAF1 wurde im Kontext hämatologischer Malignome relevanter Transkriptionskomplexe sowie breiterer Modelle onkogener „transcriptional addiction“ untersucht. In Mausmodellen ist eine Manipulation von **Eaf1** daher nützlich, um zu untersuchen, wie die Kontrolle der Transkriptionselongation die Linienfestlegung und krankheitsassoziierte Genexpressionszustände beeinflusst.

EAF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Eaf1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

EAF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Eaf1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen EAF1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Eaf1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.