Partículas Lentivirales de Activación (h) E6BP: sc-409673-LAC

RCN2 codifica la proteína de unión a E6 (E6BP), una proteína luminal del retículo endoplásmico implicada en la regulación dependiente de calcio de la vía secretora y en la homeostasis del RE. Se considera que E6BP influye en el plegamiento y el tráfico de proteínas mediante procesos de control de calidad asociados al RE y puede converger con la señalización de respuesta al estrés que configura la proteostasis celular. La regulación alterada de proteínas de unión a calcio residentes del RE, incluida E6BP, se ha asociado con cambios en la secreción, la supervivencia celular bajo estrés y fenotipos relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos que implican desequilibrio de la proteostasis. Por lo tanto, RCN2/E6BP humano sirve como un nodo útil para estudiar la función del RE, el manejo del calcio y las redes de señalización vinculadas a la secreción.

Las partículas de activación lentiviral E6BP (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RCN2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral E6BP (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RCN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de E6BP. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RCN2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.