E2F-5 Double Nickase Plasmid (h): sc-401915-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das E2F-5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- E2F-5 Double-Nickase-Plasmid (h) und E2F-5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf E2F5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: E2F-5: sc-374268
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
E2F-5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401915-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
E2F-5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401915-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
E2F5 kodiert E2F-5, ein Mitglied der E2F-Familie von Transkriptionsfaktoren, die die Zellzykluskontrolle koordinieren, indem sie Gene regulieren, die für den G1/S-Übergang, die DNA-Replikation und Checkpoint-Antworten erforderlich sind. Die Funktion von E2F-5 ist eng mit der RB/E2F-Achse verknüpft und integriert Cyclin–CDK-Aktivität mit Transkriptionsprogrammen, die Proliferation, Differenzierung und Quieszenz steuern. Durch Bindung an Promotoren im Verbund mit DP-Proteinen und Repressoren der RB-Familie beeinflusst E2F-5 Chromatinstruktur und Transkriptionsoutput in Signalwegen, die Wachstumskontrolle und Entscheidungen über das Zellschicksal regulieren. Eine dysregulierte E2F5-Signalgebung wurde mit aberranten proliferativen Zuständen und tumorassoziierten Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht und stellt daher einen nützlichen Knotenpunkt dar, um Fehlregulationen des Zellzyklus in krankheitsrelevanten Kontexten zu untersuchen.
E2F-5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des E2F5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von E2F5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die E2F5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit E2F5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.