Plásmido CRISPR de Activación (h) E-Selectin/CD62E/SELE: sc-400452-ACT

SELE codifica la E-selectina (CD62E), una molécula de adhesión endotelial inducible que se sobreexpresa rápidamente en respuesta a citocinas inflamatorias como TNF-α e IL-1β mediante vías de señalización dependientes de NF-κB y MAPK. La E-selectina de superficie media el anclaje inicial y el rodamiento de los leucocitos sobre el endotelio activado al unirse a ligandos sialilados y fucosilados, coordinando la extravasación leucocitaria durante la inflamación aguda y crónica. Esta cascada de adhesión se interseca con programas de activación vascular que influyen en la permeabilidad endotelial, la presentación de citocinas/quimiocinas y el posterior arresto firme mediado por integrinas. La expresión desregulada de SELE se estudia con frecuencia en modelos de inflamación vascular y disfunción endotelial relevantes para la aterosclerosis, la lesión por isquemia-reperfusión, la inflamación autoinmunitaria y la angiogénesis asociada a tumores.

E-Selectin/CD62E/SELE El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SELE sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

E-Selectin/CD62E/SELE El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SELE en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SELE, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de E-Selectin/CD62E/SELE. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SELE y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de E-Selectin/CD62E/SELE en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía E-Selectin/CD62E/SELE en células tumorales con expresión de SELE silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.