Plásmido Doble Nickase (m) E-cadherin: sc-419587-NIC

El gen Cdh1 del ratón codifica la E-cadherina, una glicoproteína de adhesión célula–célula dependiente de Ca2+ que forma uniones adherentes mediante unión homofílica y su conexión con el citoesqueleto de actina a través de las cateninas. La E-cadherina contribuye a establecer la polaridad epitelial, la integridad de la barrera y la morfogénesis tisular, integrándose con redes de señalización como las vías Wnt/β-catenina, Hippo y Rho GTPasas, que coordinan la tensión en las uniones y programas transcripcionales. La alteración de la adhesión mediada por E-cadherina se asocia estrechamente con la transición epitelio-mesénquima, cambios en la migración celular y pérdida de la diferenciación. En modelos murinos, la perturbación de Cdh1 se utiliza ampliamente para estudiar defectos del desarrollo, la homeostasis epitelial y los mecanismos que subyacen a fenotipos invasivos en contextos relevantes para la enfermedad.

E-cadherin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cdh1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cdh1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cdh1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cdh1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.