E-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419587-ACT

Cdh1 codifica a E-caderina, um receptor de adesão célula–célula dependente de Ca2+ que organiza as junções aderentes por meio de ligação homofílica e de sua conexão ao citoesqueleto de actina via cateninas. Esse complexo é central para a polaridade epitelial, a arquitetura tecidual e a inibição por contato, além de modular redes de sinalização que incluem Wnt/β-catenina, Hippo/YAP-TAZ e vias de receptores de fatores de crescimento, que coordenam diferenciação e proliferação. Em modelos murinos, a alteração da expressão de E-caderina compromete a integridade da barreira epitelial e a morfogênese, sendo amplamente utilizada como um marcador molecular de plasticidade epitélio–mesenquimal em estudos de invasão e competência metastática. A disfunção desregulada de CDH1/E-caderina está frequentemente associada à progressão tumoral, à disfunção inflamatória de barreira e a defeitos do desenvolvimento, reforçando sua importância na pesquisa mecanística de doenças.

E-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cdh1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

E-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cdh1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cdh1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de E-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cdh1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de E-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via E-cadherin em células tumorais com expressão de Cdh1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.