Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dyrk3: sc-405124-ACT

DYRK3 code la kinase 3 à double spécificité régulée par phosphorylation sur tyrosine (Dyrk3), une kinase sérine/thréonine impliquée dans la coordination des réponses cellulaires au stress et de la dynamique de signalisation via la phosphorylation de protéines régulatrices. Dyrk3 a été associée au contrôle de l’homéostasie protéique, au comportement des granules de stress et des condensats cytoplasmiques, ainsi qu’à la modulation de voies dépendantes de kinases qui influencent les programmes de prolifération et de survie. En tant que membre de la famille des kinases DYRK, l’activité de DYRK3 s’inscrit dans des réseaux plus larges de phosphorégulation affectant la progression du cycle cellulaire et les réponses adaptatives aux signaux environnementaux. Une expression ou une signalisation DYRK3 dérégulée a été étudiée dans des contextes de signalisation oncogénique et d’altération de l’adaptation au stress, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du remodelage des voies de signalisation.

Dyrk3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DYRK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dyrk3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DYRK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DYRK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dyrk3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DYRK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dyrk3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dyrk3 dans les cellules tumorales présentant une expression de DYRK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.