Plásmido CRISPR de Activación (h) Dyrk2: sc-403999-ACT

DYRK2 codifica la quinasa 2 regulada por fosforilación de tirosina de doble especificidad (Dyrk2), una quinasa de serina/treonina que modula la estabilidad de las proteínas y la progresión del ciclo celular mediante señalización dependiente de fosforilación. Dyrk2 se ha relacionado con la regulación de las vías de ubiquitina–proteasoma, incluido el control de sustratos implicados en respuestas al daño del ADN y en programas transcripcionales adaptativos al estrés. Al influir en el control de puntos de control, la señalización relacionada con la apoptosis y la proteostasis, la actividad de DYRK2 puede modelar fenotipos de proliferación y supervivencia celular. La expresión o señalización desregulada de DYRK2 se ha asociado con alteraciones en el control del crecimiento y en procesos de mantenimiento del genoma relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos proliferativos.

Dyrk2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DYRK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dyrk2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DYRK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DYRK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dyrk2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DYRK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dyrk2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dyrk2 en células tumorales con expresión de DYRK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.