Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dyrk1B: sc-403880-ACT

DYRK1B code la kinase 1B à double spécificité régulée par phosphorylation sur tyrosine (Dyrk1B), une kinase sérine/thréonine qui module la progression du cycle cellulaire, la quiescence cellulaire et les programmes de différenciation via la phosphorylation de protéines régulatrices. L’activité de Dyrk1B s’inscrit à l’interface de réseaux de signalisation qui contrôlent les réponses au stress et l’homéostasie métabolique, notamment des voies influençant le contrôle transcriptionnel, le renouvellement des protéines et la signalisation dépendante des facteurs de croissance. Des altérations de l’expression de DYRK1B ou de l’activité de sa kinase ont été associées à des phénotypes de prolifération et de survie dérégulés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique, du remodelage tissulaire et de la biologie des maladies métaboliques. En tant que régulateur endogène des sorties de signalisation pilotées par des kinases, DYRK1B est fréquemment étudié pour son rôle dans les interactions entre voies (crosstalk) et le contrôle, dépendant du contexte, des états d’expression génique.

Dyrk1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DYRK1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dyrk1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DYRK1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DYRK1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dyrk1B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DYRK1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dyrk1B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dyrk1B dans les cellules tumorales présentant une expression de DYRK1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.