Plásmido Doble Nickase (h) Dynamin I: sc-401183-NIC

DNM1 codifica la dinamina I, una gran GTPasa enriquecida en neuronas que cataliza la escisión de membranas durante la endocitosis mediada por clatrina y el reciclaje de vesículas sinápticas. Mediante la oligomerización dependiente de GTP en el cuello de las vesículas en gemación, la dinamina I se coordina con adaptadores endocíticos y factores reguladores de la actina para mantener el tráfico vesicular, la liberación de neurotransmisores y la homeostasis de membrana. La actividad de DNM1 se integra en vías que gobiernan la transmisión sináptica, el transporte vesicular y la remodelación de membranas, y sus alteraciones se han vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y epilépticos. La endocitosis desregulada y la dinámica de las vesículas sinápticas asociadas a DNM1 proporcionan un punto de entrada mecanístico para estudiar la excitabilidad neuronal, la función de redes y la proteostasis dependiente del tráfico.

Dynamin I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNM1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.