Plásmido Doble Nickase (m) Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3: sc-420082-NIC

El gen Dvl3 de ratón codifica Dishevelled 3 (Dvl-3), una fosfoproteína citoplasmática que actúa como andamiaje central en la señalización Wnt. Dvl-3 transmite señales desde los receptores Frizzled hacia efectores aguas abajo tanto en la transcripción canónica dependiente de β-catenina como en las vías no canónicas de polaridad planar celular y Wnt/Ca²⁺, influyendo en la polaridad celular, la migración y la remodelación del citoesqueleto. A través de estas redes, DVL3 contribuye al patrón embrionario y a la homeostasis tisular, y la señalización Wnt–Dishevelled desregulada se implica con frecuencia en la señalización oncogénica, defectos del desarrollo y la remodelación asociada a fibrosis. Por ello, la alteración de Dvl3 se utiliza ampliamente para investigar el “cross-talk” de la vía con GSK3β/β-catenina, la señalización JNK y la dinámica de actina mediada por pequeñas GTPasas.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dvl3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dvl3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dvl3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dvl3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.