Plásmido Doble Nickase (m) Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2: sc-420081-NIC

El gen Dvl2 del ratón codifica Dishevelled 2 (DVL2), un andamio citoplasmático que transmite señales de ligandos Wnt desde los receptores Frizzled hacia los efectores aguas abajo. DVL2 integra programas transcripcionales canónicos de Wnt/β-catenina con las vías no canónicas de polaridad celular planar y Wnt/Ca²⁺, influyendo en la polaridad celular, la remodelación del citoesqueleto, la migración y el patrón del desarrollo. Mediante la modulación de la salida de la vía, DVL2 contribuye al control dependiente del contexto de la proliferación y la diferenciación, por lo que se estudia ampliamente en la morfogénesis tisular y la biología de células madre. La desregulación de la señalización Wnt–Dishevelled se ha implicado en defectos congénitos del desarrollo y en la reconfiguración de la señalización asociada a enfermedad, lo que respalda investigaciones mecanísticas de la regulación de la vía en modelos murinos.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dvl2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dvl2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dvl2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dvl2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.