Plásmido Doble Nickase (h) Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2: sc-400571-NIC

DVL2 codifica Dishevelled 2 (Dvl-2), una fosfoproteína citoplasmática que actúa como transductor central de señales para los receptores Frizzled en las vías Wnt. Mediante interacciones proteína–proteína reguladas, Dvl-2 coordina la señalización Wnt canónica/β-catenina y las vías no canónicas de polaridad celular planar y Wnt/Ca²⁺, influyendo en la especificación del destino celular, la polaridad, la motilidad y la organización del citoesqueleto. La actividad aberrante de DVL2 o la reconfiguración de la vía se asocian con la desregulación de la señalización Wnt observada en diversos cánceres y fenotipos del desarrollo, lo que la convierte en un nodo útil para diseccionar la comunicación cruzada entre vías y las salidas de señalización dependientes del contexto. DVL2 también se integra con el tráfico endocítico y la dinámica de andamiajes de señalización, apoyando estudios mecanísticos de eventos proximales al receptor y de programas transcripcionales aguas abajo.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DVL2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DVL2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DVL2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DVL2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.