Plásmido Doble Nickase (h) Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1: sc-400785-NIC

DVL1 codifica Dishevelled 1 (Dvl-1), un andamiaje citoplasmático central que acopla los receptores Frizzled a la señalización Wnt aguas abajo. Mediante interacciones reguladas y fosforilación, DVL1 coordina programas transcripcionales canónicos de Wnt/β-catenina, así como las vías no canónicas de polaridad celular planar y Wnt/Ca²⁺, que moldean la dinámica del citoesqueleto, la polaridad y la migración celular. La actividad de DVL1 influye en el patrón de desarrollo, el comportamiento tipo célula madre y la homeostasis tisular, y la señalización aberrante Wnt–Dishevelled se asocia con frecuencia con proliferación e invasión desreguladas en biología del cáncer. Estas propiedades hacen de DVL1 un objetivo útil para analizar la comunicación cruzada entre vías, el ensamblaje del signalosoma y las salidas de Wnt específicas del contexto en células humanas.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DVL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DVL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DVL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DVL1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.