Plásmido CRISPR de Activación (h) Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1: sc-400785-ACT

El DVL1 humano codifica Dishevelled 1 (Dvl-1), una proteína andamiaje citoplasmática que transduce señales desde los receptores Frizzled/LRP hacia las vías Wnt posteriores. Dvl-1 coordina la señalización Wnt/β-catenina canónica mediante la regulación del complejo de destrucción de β-catenina y también participa en la polaridad celular planar no canónica y en la señalización Wnt/Ca²⁺, que moldean la polaridad, la migración y la organización del citoesqueleto. A través de estas vías, DVL1 influye en decisiones de destino celular, el patrón tisular y fenotipos tipo célula madre, y la desregulación de la señalización Wnt–DVL se implica con frecuencia en programas transcripcionales oncogénicos y trastornos del desarrollo. Las alteraciones en la actividad de estas vías se estudian a menudo en contextos como la transición epitelio-mesenquimal, la invasión y la diferenciación aberrante.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DVL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DVL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DVL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DVL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 en células tumorales con expresión de DVL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.