Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1: sc-400785-ACT

Le gène humain DVL1 code Dishevelled 1 (Dvl-1), une protéine d’échafaudage cytoplasmique qui transmet les signaux des récepteurs Frizzled/LRP vers les voies Wnt en aval. Dvl-1 coordonne la signalisation Wnt/β-caténine canonique en régulant le complexe de dégradation de la β-caténine et participe également aux voies non canoniques de polarité planaire (PCP) et Wnt/Ca²⁺, qui modèlent la polarité, la migration et l’organisation du cytosquelette. Par l’intermédiaire de ces voies, DVL1 influence les décisions de destinée cellulaire, la mise en place des tissus et des phénotypes de type « cellules souches », et une dérégulation de la signalisation Wnt–DVL est fréquemment impliquée dans des programmes transcriptionnels oncogéniques et des troubles du développement. Les altérations de l’activité de ces voies sont souvent étudiées dans des contextes tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, l’invasion et la différenciation aberrante.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DVL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DVL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DVL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DVL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DVL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.