Plasmide CRISPR/Cas9 KO DUSP22 (h): sc-405867

Présentation

DUSP22 code une phosphatase à double spécificité qui déphosphoryle des résidus sérine/thréonine et tyrosine afin de moduler des réseaux de signalisation pilotés par des kinases. Elle est impliquée dans la régulation des sorties de la voie MAPK et dans le contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la signalisation des récepteurs immunitaires, influençant les programmes transcriptionnels, les états d’activation cellulaire et l’apoptose. En ajustant la dynamique de phosphorylation, DUSP22 contribue à l’homéostasie cellulaire dans les tissus hématopoïétiques et d’autres tissus où une signalisation réactive aux stimuli est essentielle. Des altérations de l’expression de DUSP22 ou du contexte des voies associées ont été reliées à une signalisation immunitaire dérégulée et à des processus oncogéniques, ce qui appuie son utilisation comme nœud mécanistique dans l’étude de la biologie des maladies guidées par la signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DUSP22 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DUSP22 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DUSP22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DUSP22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DUSP22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DUSP22 pour l'étude de la signalisation de DUSP22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DUSP22 essentiels à la fonction de DUSP22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DUSP22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DUSP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DUSP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DUSP22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DUSP22 plasmide HDR (h) et le DUSP22 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DUSP22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DUSP22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.