DUSP22 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-430587-ACT

Das Mausgen **Dusp22** kodiert die Dual‑Spezifitätsphosphatase 22 (**DUSP22**), eine atypische MAPK‑Phosphatase, die phosphorylierungsabhängige Signalwege moduliert, indem sie Serin/Threonin‑ und Tyrosinreste an ausgewählten Substraten dephosphoryliert. DUSP22 wird mit der Regulation des Outputs des MAPK‑Signalwegs in Verbindung gebracht und formt nachgeschaltete Transkriptionsprogramme, die die Aktivierung von Immunzellen, Stressantworten und Differenzierungsprozesse beeinflussen. Durch die Feinabstimmung von Amplitude und Dauer kinasegetriebener Signale kann DUSP22 Prozesse wie Zytokinsignalisierung, Apoptose und zelluläre Homöostase beeinflussen. Eine veränderte Phosphataseaktivität innerhalb MAPK‑regulierter Netzwerke ist für entzündliche Phänotypen und Kontexte proliferativer Signalgebung relevant und unterstützt mechanistische Studien zur Kontrolle von Signalwegen in Mausmodellen.

DUSP22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Dusp22-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DUSP22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Dusp22-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Dusp22-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DUSP22-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Dusp22-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DUSP22-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DUSP22-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Dusp22-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.