DUOX2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403534

Descripción general

DUOX2 (dual oxidasa 2) codifica una NADPH oxidasa asociada a la membrana que genera peróxido de hidrógeno en la superficie apical de las células epiteliales, proporcionando sustrato para reacciones mediadas por peroxidasas y para la señalización dependiente del estado redox. Como parte de la defensa innata de la mucosa, la actividad de DUOX2 se integra con la señalización de calcio, las respuestas JAK/STAT impulsadas por citocinas y las vías de estrés oxidativo que determinan la función de barrera y los programas antimicrobianos. La expresión o actividad desregulada de DUOX2 se ha vinculado con la susceptibilidad a la enfermedad inflamatoria intestinal, la inflamación crónica de la mucosa y alteraciones en las interacciones huésped–microbioma; también se estudia en el contexto de la hormonogénesis tiroidea y la carcinogénesis epitelial. Dado que las especies reactivas de oxígeno (ROS) derivadas de DUOX2 pueden modular la señalización de MAPK y NF-κB, con frecuencia se investiga su impacto sobre la proliferación, la diferenciación y las respuestas al daño del ADN en modelos epiteliales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DUOX2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DUOX2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DUOX2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DUOX2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DUOX2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DUOX2 para la investigación de la señalización de DUOX2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DUOX2 críticos para la función de DUOX2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DUOX2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DUOX2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DUOX2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DUOX2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DUOX2 (h) y el plásmido HDR DUOX2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DUOX2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DUOX2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.