DSPP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401195-NIC

A dentina sialofosfoproteína (DSPP) é um precursor da matriz extracelular secretado que é processado proteoliticamente em sialoproteína da dentina e fosfoproteína da dentina, componentes-chave que regulam a nucleação mineral, o crescimento dos cristais e a organização da matriz em tecidos mineralizados. Nos odontoblastos, a DSPP contribui para a dentinogênese ao coordenar a maturação da matriz rica em colágeno e a deposição de hidroxiapatita, influenciando o manejo de cálcio/fosfato e o remodelamento da matriz extracelular. Alterações na expressão ou na sequência da DSPP desorganizam a dinâmica de mineralização da dentina e estão associadas a defeitos hereditários da dentina, tornando-a um locus útil para estudar relações genótipo–fenótipo na biologia craniofacial. A DSPP também serve como marcador de diferenciação odontogênica em modelos de células-tronco e de desenvolvimento, nos quais sinais da matriz extracelular moldam a arquitetura tecidual.

DSPP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DSPP em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DSPP. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DSPP. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DSPP interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.