Plásmido Doble Nickase (h) DSPP: sc-401195-NIC

La dentina sialofosfoproteína (DSPP) es un precursor secretado de la matriz extracelular que se procesa proteolíticamente en sialoproteína de la dentina y fosfoproteína de la dentina, componentes clave que regulan la nucleación mineral, el crecimiento cristalino y la organización de la matriz en tejidos mineralizados. En los odontoblastos, DSPP contribuye a la dentinogénesis al coordinar la maduración de una matriz rica en colágeno y la deposición de hidroxiapatita, influyendo en el manejo de calcio/fosfato y en la remodelación de la matriz extracelular. La expresión o la secuencia alteradas de DSPP perturban la dinámica de mineralización de la dentina y se asocian con defectos dentinarios hereditarios, lo que la convierte en un locus útil para estudiar relaciones genotipo–fenotipo en biología craneofacial. DSPP también sirve como marcador de diferenciación odontogénica en modelos de células madre y de desarrollo, en los que las señales de la matriz extracelular determinan la arquitectura tisular.

DSPP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DSPP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DSPP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DSPP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DSPP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.