Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
dsg1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401442
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- dsg1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico dsg1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: dsg1 Antibody (B-11): sc-137164
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
dsg1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401442 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DSG1 codifica per la desmogleina-1 (dsg1), una proteina di adesione desmosomiale della famiglia delle caderine che rafforza le giunzioni cellula‑cellula negli epiteli stratificati e contribuisce all’integrità della barriera epidermica. Interagendo con plakoglobina, plakofiline e desmoplachina, DSG1 collega l’adesione intercellulare alle reti di filamenti intermedi e coordina differenziamento, resilienza meccanica e morfogenesi tissutale. L’alterazione dell’assemblaggio dei desmosomi dipendente da DSG1 può modificare la segnalazione dei cheratinociti, il rimodellamento delle giunzioni e le risposte allo stress. La disfunzione di DSG1, sia genetica sia acquisita, è associata a fragilità cutanea e fenotipi infiammatori, rendendola un bersaglio rilevante per lo studio dell’omeostasi epiteliale e dei meccanismi di malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO dsg1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DSG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DSG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DSG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina dsg1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DSG1 per lo studio della segnalazione di dsg1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DSG1 critici per la funzione di dsg1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DSG1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal dsg1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal dsg1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DSG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal dsg1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR dsg1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DSG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DSG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.