Plásmido CRISPR de Activación (h) DSC1: sc-402944-ACT

El gen humano **DSC1** codifica la **desmocolina-1**, una proteína de adhesión de la familia de las cadherinas dependientes de calcio localizada en los **desmosomas** de epitelios estratificados. DSC1 favorece uniones intercelulares fuertes al participar en interacciones de cadherinas desmosómicas y acoplarse a **plakoglobina**, **plakofilinas** y **desmoplaquina** para anclar los filamentos intermedios, contribuyendo así a la integridad de la barrera epidérmica y a la mecánica tisular. Su expresión está estrechamente vinculada a los programas de diferenciación de los queratinocitos y a la morfogénesis epitelial, y la regulación alterada de DSC1 se estudia en el contexto de una adhesión célula–célula comprometida, displasia epitelial y biología tumoral. Dado que la remodelación de los desmosomas se conecta con la dinámica del citoesqueleto y la señalización por estrés, DSC1 se investiga con frecuencia en vías que gobiernan la cohesión epitelial, la diferenciación y la migración.

DSC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DSC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DSC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DSC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DSC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DSC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DSC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DSC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DSC1 en células tumorales con expresión de DSC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.