Plásmido Doble Nickase (h) DRP1: sc-400459-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DRP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DRP1 (h) y el plásmido de doble nickasa DRP1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DNM1L. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DRP1 Anticuerpo (C-5): sc-271583
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DRP1 | sc-400459-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DRP1 | sc-400459-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNM1L codifica la proteína 1 relacionada con la dinamina (DRP1), una gran GTPasa que coordina la fisión mitocondrial al ensamblarse en la membrana mitocondrial externa y constriñir las membranas en coordinación con proteínas adaptadoras como FIS1, MFF y MID49/51. Mediante la regulación de la arquitectura de la red mitocondrial, DRP1 influye en la fosforilación oxidativa, el manejo de especies reactivas de oxígeno, la distribución del ADN mitocondrial y el control de calidad del orgánulo a través de la mitofagia. La dinámica dependiente de DRP1 está estrechamente acoplada a la señalización de la apoptosis y a la adaptación metabólica, lo que vincula la actividad de DNM1L con vías que gobiernan las respuestas al estrés celular y la homeostasis bioenergética. La disfunción de DRP1 y la fragmentación mitocondrial desregulada se asocian con fenotipos de neurodesarrollo y neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y programas de supervivencia de células cancerosas, lo que convierte a DNM1L en un objetivo frecuente para estudios mecanísticos de la biología mitocondrial.
DRP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNM1L en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNM1L. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNM1L. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNM1L alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.