Plásmido CRISPR de Activación (m) DRP1: sc-428678-ACT

El gen murino **Dnm1l** codifica la proteína 1 relacionada con la dinamina (**DRP1**), una GTPasa grande que orquesta la fisión mitocondrial y peroxisomal al ensamblarse en las membranas de los orgánulos y constreñirlas de manera dependiente de GTP. DRP1 integra señales de fosforilación, SUMOilación y ubiquitinación para acoplar la dinámica de fisión con el estado energético celular, la homeostasis de Ca2+ y el manejo de especies reactivas de oxígeno. A través de su papel central en la remodelación de la red mitocondrial, DRP1 influye en la mitofagia, la sensibilidad a la apoptosis y la progresión del ciclo celular, lo que hace que la regulación de Dnm1l sea muy relevante para estudios de neurodegeneración, estrés cardiometabólico, inflamación y adaptación de células cancerosas. Las perturbaciones en la actividad de DRP1 se asocian comúnmente con alteraciones en la bioenergética y en las vías de control de calidad de los orgánulos, incluida la mitofagia asociada a PINK1/Parkin y la señalización de quinasas activadas por estrés.

DRP1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Dnm1l sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DRP1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Dnm1l en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Dnm1l, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DRP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Dnm1l y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DRP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DRP1 en células tumorales con expresión de Dnm1l silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.