Plasmide CRISPR/Cas9 KO DPH2 (h): sc-409607

Présentation

DPH2 code une enzyme essentielle de la voie de biosynthèse du diphthamide, qui modifie une histidine conservée sur le facteur d’élongation de la traduction eucaryote 2 (EEF2). Cette modification post-traductionnelle contribue à la fidélité de la traduction et influence les réponses cellulaires au stress ciblant les ribosomes, reliant l’activité de DPH2 au contrôle fondamental de la synthèse protéique. La perturbation des composants de la voie du diphthamide peut altérer la protéostasie et la signalisation du stress, faisant de DPH2 un nœud pertinent pour étudier les mécanismes de régulation de la traduction. Comme le diphthamide d’EEF2 détermine aussi la sensibilité à certaines toxines bactériennes, DPH2 constitue un point d’entrée exploitable pour explorer les interactions hôte–pathogène et la biologie des toxines dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DPH2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DPH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DPH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DPH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DPH2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DPH2 pour l'étude de la signalisation de DPH2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DPH2 essentiels à la fonction de DPH2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DPH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DPH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DPH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DPH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DPH2 plasmide HDR (h) et le DPH2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DPH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DPH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.