DP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422478

Descripción general

Ptgdr codifica el receptor de prostaglandina D2 DP de ratón, un receptor acoplado a proteína G que señaliza principalmente a través de Gs para elevar el AMPc y activar programas transcripcionales dependientes de PKA. DP se activa por PGD2 producida mediante el metabolismo del ácido araquidónico y contribuye a la regulación del tono del músculo liso, la permeabilidad vascular, la inflamación de las mucosas y el tráfico de células inmunitarias. En leucocitos y tejidos de barrera, la señalización asociada a DP se integra con la producción de citocinas y la quimiotaxis, modulando respuestas inflamatorias de tipo 2 y la comunicación neuroinmunitaria. La actividad desregulada del eje PGD2–DP se ha implicado en modelos experimentales de inflamación de las vías respiratorias tipo asma, enfermedad alérgica y vías de dolor inflamatorio, lo que convierte a Ptgdr en un nodo útil para estudiar la señalización de mediadores lipídicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ptgdr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ptgdr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ptgdr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ptgdr para la investigación de la señalización de DP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ptgdr críticos para la función de DP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ptgdr para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ptgdr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DP (m) y el plásmido HDR DP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ptgdr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ptgdr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.