DOCK 7 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-426491-LAC

Dock7 codifica DOCK7, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina atipico che attiva Rac1 e Cdc42 per coordinare il rimodellamento del citoscheletro di actina, la polarità cellulare e la migrazione direzionale. Nelle cellule di topo, DOCK7 sostiene l’estensione dei neuriti e la differenziazione neuronale e contribuisce alla funzione delle cellule di Schwann e alla mielinizzazione attraverso una segnalazione dipendente dalle Rho GTPasi. Collegando i segnali extracellulari alla dinamica del citoscheletro, DOCK7 influenza processi quali la guida assonale, il traffico di membrana e la morfogenesi. Un’attività di DOCK7 deregolata è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e a programmi anomali di motilità cellulare rilevanti per studi meccanicistici dello sviluppo del sistema nervoso e di vie patogenetiche associate a malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale DOCK 7 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Dock7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DOCK 7 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Dock7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DOCK 7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Dock7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.